Belangrijkste verschil - Gramvlek versus cultuur
 

Gramkleuring is een kleurtechniek die wordt uitgevoerd om bacteriën in twee groepen te differentiëren volgens de dikte van de peptidoglycan-laag in hun celwand. Cultuur is een methode voor het kweken en in stand houden van micro-organismen onder laboratoriumomstandigheden voor verschillende analyses. Het belangrijkste verschil tussen gramvlek en cultuur is hun functie; gramstammen een kleurtechniek van bacteriën waarbij cultuur een methode is voor het kweken en in stand houden van micro-organismen.

INHOUD
1. Overzicht en belangrijkste verschil
2. Wat is gramkleuring
3. Wat is cultuur
4. Zij aan zij vergelijking - gramkleuring versus cultuur
5. Samenvatting

Wat is gramvlek?

Gramkleuring is een belangrijke differentiële kleuringstechniek die wordt gebruikt voor bacteriële identificatie in de microbiologie. Deze techniek werd geïntroduceerd door de Deense bacterioloog Hans Christian Gram in 1884. Gramkleuring categoriseert bacteriën in twee hoofdgroepen: grampositief en gramnegatief; deze zijn erg belangrijk in bacteriële classificatie en identificatie. Gramkleuring wordt uitgevoerd als een eerste stap voor bacteriële karakterisering.

Bacteriën zijn gegroepeerd op basis van de verschillen in hun celwand. Gram-positieve bacteriën bevatten een dikke peptidoglycan-laag in hun celwand, terwijl Gram-negatieve bacteriën een dunne peptidoglycan-laag in hun celwand bevatten, zoals weergegeven in figuur 01. De uitkomst van de gramkleuring is gebaseerd op het dikteverschil in de peptidoglycan-laag van de celwand.

Gramkleuring wordt uitgevoerd met behulp van vier verschillende reagentia namelijk; primaire vlek, bijtmiddel, ontkleuringsmiddel en tegenkleuring. Kristalviolet en safranine dienen als de primaire en tegenkleuren, respectievelijk, terwijl de gram jodium en 95% alcohol dienen als respectievelijk de beits en ontkleuringsmiddel.

Basisstappen van gramkleuring


  1. Een bacterievlek wordt op een schone glasplaat bereid, met warmte gefixeerd en gekoeld.
    Smear wordt gedurende 1-2 minuten overspoeld met kristalviolet.
    Smear wordt gespoeld met langzaam stromend kraanwater om overtollige vlekken te verwijderen.
    Gram jodium wordt gedurende 1 minuut op het uitstrijkje aangebracht.
    Uitstrijkje wordt gespoeld met langzaam stromend kraanwater
    Het uitstrijkje wordt 2 - 5 seconden gewassen met 95% alcohol en gespoeld met langzaam stromend kraanwater.
    Smear wordt 1 minuut met safranine gekleurd
    Smear wordt gespoeld met langzaam stromend kraanwater, gedroogd en waargenomen onder de microscoop.

Aan het einde van de gramkleuring zullen gram-negatieve bacteriën in roze kleur worden waargenomen, terwijl de gram-positieve bacteriën in paarse kleur worden waargenomen, zoals weergegeven in figuur 02. De uitkomst van de gramkleuring wordt bepaald door de dikte van de peptidoglycanlaag in hun celwand. Tijdens de ontkleuringsstap worden primaire vlek en het beitsmiddel gemakkelijk verwijderd uit de gramnegatieve bacteriën en worden ze kleurloos omdat ze een dunne peptidoglycanlaag hebben. De primaire vlek wordt vastgehouden in de grampositieve bacteriën, omdat deze een dikke peptidoglycanlaag hebben. Tegenkleuring is niet effectief voor grampositieve bacteriën vanwege het behoud van de primaire vlek. Gram-positieve bacteriën zijn dus zichtbaar in de primaire kleur van de vlek, d.w.z. de paarse kleur. Tegenkleuring kleurt de gramnegatieve bacteriën en is zichtbaar in de pickkleur, de safranin-kleur. Daarom is het gemakkelijk om bacteriën in twee groepen in te delen op basis van de gramkleuring en het is waardevol in bacteriële differentiatie en identificatie.

Wat is cultuur?

Microbiële cultuur is een methode voor het kweken en in stand houden van micro-organismen onder laboratoriumomstandigheden voor verschillende doeleinden. Culturen worden gekweekt in vaste, halfvaste en vloeibare media op basis van het type en het doel van het kweken van micro-organismen. Culturen worden voorzien van noodzakelijke voedingsstoffen en groeiomstandigheden vereist door de micro-organismen. Er zijn verschillende componenten van een kweekmedium zoals energiebron, koolstofbron, stikstofbron, mineralen, micronutriënten, water, stollingsmiddel, enz. De optimale temperatuur, zuurstof en pH moeten worden aangepast aan het type van het geteelde micro-organisme.

Er zijn verschillende soorten microbiële culturen; bijvoorbeeld batchcultuur, continue cultuur, steekcultuur, agarplaatcultuur, bouilloncultuur, enz. Afhankelijk van de samenstelling van het groeimedium zijn er verschillende soorten cultuurmedia bekend als synthetische media, semi-synthetische media en natuurlijke media. Microbiële culturen worden bereid onder steriele omstandigheden in een speciale kamer genaamd laminaire luchtstroom. Groeimedium en het glaswerk worden gesteriliseerd voorafgaand aan inoculatie van het gewenste micro-organisme. Onder de juiste steriele omstandigheden wordt het doelmicro-organisme in het gesteriliseerde voedingsmedium overgebracht en bij optimale temperatuur geïncubeerd. In het medium zal het micro-organisme groeien en zich vermenigvuldigen met de meegeleverde voedingsstoffen.

Wat is het verschil tussen gramvlek en cultuur?

Samenvatting - Gramvlek versus cultuur

Microbiële culturen worden bereid en onderhouden onder laboratoriumomstandigheden voor verschillende doeleinden, zoals opslag, testen, chemische zuivering, enz. Gramkleuring is een kleuringsprocedure die bacteriën onderscheidt in twee hoofdgroepen die gramnegatieve bacteriën en grampositieve bacteriën worden genoemd. Daarom is het verschil tussen de gramkleuring en de cultuur dat gramkleuring een kleurtechniek van bacteriën is, terwijl de cultuur een methode is voor het kweken en in stand houden van micro-organismen in de laboratoria.

Referentie:
1. Aryal, Sagar. “Gramkleuring: principe, procedure, interpretatie, voorbeelden en animatie.” Opmerkingen over online microbiologie. N.p., 20 september 2015. Web. 01 maart 2017.
2. "Microbiologische cultuur." Wikipedia. Wikimedia Foundation, 01 februari 2017. Web. 01 maart 2017
3. Kumar, Sabarish. "Wat zijn de basistechnieken van microbiële cultuur?" Wat zijn de basistechnieken van microbiële cultuur? N.p., n.d. Web. 01 maart 2017

Afbeelding met dank aan:
1. "Gram-Cell-wall" Graevemoore inglise Vikipeediast (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia
2. "Gram Strain" Door Y tambe - Y tambe's bestand (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia
3. "Anthrax Culture" door US Army Medical Research Institute of Infectious Diseases foto - (Public Domain) via Commons Wikimedia